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T7 Express LysY/Iq 感受态细胞,科惟生物
中文名称：T7 Express LysY/Iq 感受态细胞产品规格 ：10*100μL 产品品牌：科惟生物 交 货 期：现货 |
T7 Express LysY/Iq 化学感受态
产品简介 T7 Express LysY/Iq 是 BL21 菌株的衍生菌株 ， 广泛用于蛋白的原核表达实验 。T7 Express lysY/Iq 菌株 中的 T7 RNA 聚合酶基因整合在细菌染色体上的 lac 操纵子区域(基因组中无λ前噬菌体序列)可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶 ， 用于 pET 系列 ， pGEX ， pMAL 等质粒的蛋白表达 。Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷可促进表达蛋白的稳定 。 fhuA2 突变赋予 T7 Express lysY/Iq 菌株对噬菌体 T1 的抗性 。LysY 质 粒(携带氯霉素抗性)是 T7 溶菌酶的一个变体 ，缺乏任何酰胺酶活性 ， 因此细胞在诱导过程中对裂解不太敏 感 。 而且 T7 溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平 ， 同时不干扰 IPTG 诱导的表达 。 不限制甲基化 DNA(McrA- 、McrBC- 、EcoBr-m- 、Mrr-) 。LysY 溶菌酶/lacIq 质粒的维持不需要抗生素选择。总的来说 ，lacIq 对表达的严格控制允许克隆潜在毒性基因 ， T7 溶菌酶控制 T7 RNA 聚合酶可以表达毒性基因 。经 pUC19质粒转化检测 ， T7 Express LysY/Iq 感受态细胞的转化效率可达 108 cfu/ μg DNA。 产品组成
基因型： MiniF lysYlacIq (CamR) /fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr- 73::miniTn10 --TetS )2 [dcm] R(zgb- 210::Tn10--TetS ) endA1 Δ(mcrC-mrr) 114::IS10 存储条件-80℃保存； 请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存! 使用方法 1. 解冻感受态细胞： 从-80℃取感受态细胞 ， 放置在冰浴或冰水浴中融化 ，约 5- 10 min ， 放置时间过长会影响转化效率。 2. DNA 样品的转化：每 100 μL 感受态加入待转化 DNA 样品(例如质粒、连接产物或重组产物等) 约 10 μL ，然后轻轻弹击管底约 2-3 次，立即冰上静置孵育 30 min。
3. 热激处理： 将冰浴后的离心管快速置于 42℃水浴中 ， 静置热激 90 s 。 随后立即转移至冰水浴中静置 2-3 min 以快速冷却。热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。 4. 复苏培养： 加入 900 μL 37 C预热的 LB 或 SOC 培养基 ， 颠倒数次混匀 ， 37℃摇床约 220rpm 复苏培养 45 min。 5. 收菌涂板： 如果用于质粒的转化扩增 ，建议直接取 50- 100 μL 进行涂板即可；如果用于连接产 物或重组产物的转化 ，建议先 5000 g ， 1 min 室温离心沉淀细菌 ，吸除约 900-950 μL 上清 ，然后用剩余的约50- 100 μL 菌液重悬 ， 涂布到含相应抗生素的 LB 平板上。 6. 过夜培养 ：将平板倒置放于 37℃培养箱培养过夜。培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍 ，有利于形成单克隆。 注意事项 1 . 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用； 2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/ 10； 3. 加入待转化 DNA 后 ，不要用移液器吹吸感受态细胞 ，仅用手指轻弹即可； 4. 为确保更高转化效率 ，整个操作过程中除热激外均要保持低温 ，并且要尽量轻柔。
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如果用于质粒的转化扩增 ，冰浴静置约 10 min 后可以直接涂板并培养过夜； 如果用于连接产 物或重组产物的转化 ，建议冰浴静置 30 分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤 ， 以提高转化效率。
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