永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC-D3 ）,科惟生物

中文名称：永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC-D3 ） 产品货号：KW-h070 规格 ：1x106 产品品牌：科惟生物 交 货  期：现货 种属 人 别称 HCMEC/D3; CMEC/D3; human Cortical Microvessels Endothelial Cells/D3 组织来源 人脑微血管 疾病 转化细胞系 传代比例/细胞消化 1 ：2-1:3传代 ，消化1-2分钟 完全培养基配置 ECM培养基 简介 hCMEC/D3 细胞系来源于人颞叶微血管 ，该微血管从手术期间切除的组织中分离出来 ，用于控制癫痫。初级分离物富含脑内皮细胞（ CEC ）。在第一个通道中 ，细胞通过慢病毒载体转导与人端粒酶催化亚基 (hTERT) 和 SV40 大 T 抗原依次永生化 ，然后通过有限稀释克隆选择性分离 CEC ，并对克隆进行广泛的脑内皮表型表征。这种脑微血管内皮细胞系代表了一种这样的人类 BBB 模型 ，它可以很容易地生长 ，并且可以对与中枢神经系统 (CNS) 相关的病理和药物转运机制进行细胞和分子研究。 形态 上皮细胞样 生长特征 贴壁生长 倍增时间 每周 2 至 3 次 STR Amelogenin X CSF1PO 10,12 D1S1656 15.3,17.3 D2S441 13 D2S1338 16,20 D3S1358 16,17 D5S818 11 D7S820 10,12 D8S1179 15,16 D10S1248 14,15 D12S391 19.3,22 D13S317 11,14 D16S539 9,12 D18S51 12,19 D21S11 30,32.2 D22S1045 11,15 FGA 22,26 Penta D 10,12 Penta E 5,10 TH01 7,9 TPOX 10,11 vWA 14,17 培养条件 气相 ：空气 ，95% ；二氧化碳 ，5%。 温度 ：37摄氏度 ，培养箱湿度为70%-80%。 冻存条件 冻存液 ：90%FBS ，DMSO 10%, 或使用非程序冻存液 保藏机构 BCRJ 0401 产品使用 仅限于科学研究 ，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 细胞接收处理流程 ： 1 ：观察有无破损漏液情况 ，如有请拍照及时联系客服。 2 ：酒精消毒培养瓶表面后显微镜下观察细胞状态 ，观察拍照后不用打开培养瓶盖 放入培养箱静止2-3小时稳定 细胞状态。 3 ：请按照细胞操作指南进行第一次传代冻存处理。 4 ：若产品有异常或其他疑问 ，可随时联系客服 ；转至技术支持。 细胞接收后的处理 1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-4h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。 2）静置完成后，请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10× , 20×) 各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。 4）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收 。 5）半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。 6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。 细胞处理： 1. 复苏细胞：从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热 37℃。 1) 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻； 2) 加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。 3) 弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基接种于 T25 培养瓶中（或 6cm 皿中）， 培养过夜，第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2. 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次； 2) 加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 2-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化； 3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000rpm离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀； 4) 按 5-6mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8mL完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。 （即 1 个 T25 传代接种至 2~3 个 T25 或者 2~3 个直径为 6cm 的培养皿） 3. 细胞冻存： 1）细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1× 10^6~1×107个活细胞/ml. 2）1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每 1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、 日期等信息。 3） 按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜，后续可转入液氮罐中长期保存。

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