常温细胞收货当天处理方式

1.收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

2. 镜下观察有无微生物污染现象，拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象， 方便后续 售后处理。

3. 消毒后，更换赠送的完全培养液放置培养箱静止2-3小时。如细胞有多数悬浮细胞需要离心收集 重新接种止培养瓶。

4. 观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代，请根据实际情况决定)，

首次传代推荐比例 1：2 到 1：3（按实际收货细胞密度决定，若不确定 可联系技术支持）；若细 胞密度不到 80%则可继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖；悬浮细胞注意离心所有培养基以收 集细胞。

5. 由于气温，运输等影响造成贴壁细胞漂浮的，请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代 （参考附件），或及时联系技术支持进行指导传代。

贴壁细胞传代：1.从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃；

2.从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次

3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入预热的胰酶；胰酶量应足以覆盖细胞层 (T25为1ml)；

4.将培养容器在室温下孵育约 2分钟（请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异）； 5.在显微镜下观察细胞解离情况；如果解离程度未达 90%，可将孵育时间延长几分钟，每 30 秒 钟检查一次解离情况；

6.细胞解离程度大于等于 90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽；加入所用解离剂两倍 体积的预热完全生长培养基；吹打细胞层表面数次，使培养基分散；

7.将细胞转移到15mL 无菌离心管中，以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟

（请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；

8.用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适

量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱（注：如果使用培养瓶，将其放 入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶

盖）。

悬浮细胞传代：将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm 离心 5min，收集上清，加 1-   2ml 完全培养基重悬，按 1:2 比例进行比例传代分到新T25瓶中，补充5-8ml/瓶新的完全培养基 ， 最后放入细胞培养箱中培养。