BL21(DE3)化学感受态

 产品简介

BL21(DE3)  感受态细胞适用于无毒异源基因的表达 。该菌株含有受 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚 合酶基因(λDE3)，可实现 IPTG 诱导的 T7 RNA 聚合酶表达。BL21(DE3)是一种大肠杆菌 B 菌株，不含 lon 蛋白酶 。其也缺乏外膜蛋白酶 OmpT 。不存在这两种关键蛋白酶可降低细胞中表达的异源蛋白的降解 。转

化效率超过 107 cfu/μg DNA， 可以用于 pET 等系列质粒的蛋白高效表达。

 产品组成

基因型： F- ompT hsdSB  (rB- mB-) galdcm (DE3)

 存储条件

-80℃保存； 请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存!

 使用方法

1.  解冻感受态细胞：从-80 ℃取感受态细胞,  放置在冰浴或冰水浴中融化,约 5- 10 min,  放置时间 过长会影响转化效率。

2.  DNA 样品的转化:  每 100 μL 感受态加入待转化 DNA 样品(例如质粒、连接产物或重组产物等) 约 10 μL ，然后轻轻弹击管底约 2-3 次，立即冰上静置孵育 30 min。

  加入待转化 DNA 样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的 10%。

  加入待转化 DNA 样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。

  如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约 10 min 后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产 物或重组产物的转化，建议冰浴静置 30 分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤， 以提高转化效率。

3.  热激处理：将冰浴后的离心管快速置于 42℃水浴中，静置热激 90 s 。随后立即转移至冰水浴

中静置 2-3 min 以快速冷却。

  热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4.  复苏培养：加入 900 μL 37 ℃预热的 LB 或 SOC 培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约 220 rpm 复苏培养 45 min。

5.  收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取 50- 100 μL 进行涂板即可；如果用于连接产 物或重组产物的转化，建议先 5000 g ，1 min 室温离心沉淀细菌，吸除约 900-950 μL 上清，然后用剩余的约 50- 100 μL 菌液重悬，涂布到含相应抗生素的 LB 平板上。